第二章　抗中性粒细胞胞浆抗体检测方法

ANCA的检测方法包括间接免疫荧光（indirect immunofluorescence，IIF）法及针对靶抗原特异性自身抗体的各种免疫学方法。

IIF-ANCA以乙醇和甲醛固定的中性粒细胞为标准实验基质，为便于更好的进行荧光结果的判读，建议同时结合HEp-2细胞等实验基质以排除抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）的干扰。IIF-ANCA通常使用荧光素标记的抗人IgG抗体作为二抗。根据在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞实验基质上呈现的荧光模型，分为胞浆型ANCA（cANCA）、核周型ANCA（pANCA）及不典型ANCA（atypical ANCA，aANCA），其中不典型ANCA包括不典型cANCA和不典型pANCA。

自1982年采用IIF检测ANCA以来，IIF-ANCA的检测技术不断发展，如在中性粒细胞的实验基质上不断优化，IIF-ANCA实验操作的自动化和荧光模型的自动识别技术。新技术的应用有效避免了IIF-ANCA实验操作的费时、费力、工作效率低、实验结果判读的主观性影响及特殊培训等缺点，可促进IIF-ANCA的临床广泛应用。

ANCA针对靶抗原的特异性自身抗体主要包括MPO-ANCA、PR3-ANCA及其他。自1990年第一个商品化的ELISA试剂进行ANCA靶抗原特异性自身抗体的检测以来，不断有许多基于新原理、新技术的商品化试剂应用于ANCA临床检测。如从最初使用靶抗原直接包被微孔板的第一代ELISA检测技术（间接法），发展到使用单克隆抗体包被微孔板以结合靶抗原的第二代ELISA检测技术（捕获法），以及使用桥联分子包被微孔板以结合靶抗原的第三代ELISA检测技术（锚定法）（图2-1-1）。同时在ELISA基础上发展了斑点免疫法、线性免疫法、荧光酶免疫法、化学发光法及多元微球免疫法等新方法，从而提高了ANCA靶抗原特异性自身抗体检测的敏感性和特异性。不仅如此，目前抗MPO抗体和抗PR3抗体有参考血清，且抗MPO抗体已有标准物质（ERM-DA 476/IFCC），这些都将有助于ANCA检测的标准化。